产品货号:
GL0330
中文名称:
AO染色试剂盒
英文名称:
Acridine Orange Detection Kit
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒主要由AO Stain、AO Stain Buffer组成,常用于细胞凋亡的检测,染色后在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒,而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失,AO染色常与EB染色合用双染,EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
Acridine Orange(AO)属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色,因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合,AO嵌入核酸双链的碱基对之间,这种结合方式主要为AO与DNA的结合,其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式主要为AO与RNA的结合,其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光,因此吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色,与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。
组分 | 规格 |
试剂(A):AO Stain | 500μL |
试剂(B):AO Stain Buffer(10×) | 10mL |
保存:2~8℃,避光,有效期1年。
- 去离子水、PBS、EB染色液(备选)
- 细胞计数板、载玻片、盖玻片、荧光显微镜、低速离心机
- AO染色常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
- 如有低温离心机进行离心效果更佳,同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
- 试剂开封后请尽快使用,以防影响后续实验效果。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1×AO Stain Buffer的配制:按AO Stain Buffer(10×)∶去离子水=1∶9混匀即可。
- AO单独染色
- 收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用1×AO Stain Buffer清洗细胞1次,加入适量的1×AO Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/mL。
- 取适量的细胞悬液和AO Stain,按照细胞悬液∶AO Stain=19∶1的比例混合,轻轻混匀,如果采用荧光显微镜下观察,一般取95μL细胞悬液和5μL AO Stain混合即可。
- 室温避光染色15min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
- 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm),计数并拍照。
- 收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用1×AO Stain Buffer清洗细胞1次,加入适量的1×AO Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/mL。
- AO/EB双染色
- 收集细胞,用1×AO Stain Buffer清洗细胞1次,加入适量的1×AO Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/mL。
- 取适量的细胞悬液和AO Stain,按照细胞悬液∶AO Stain=19∶1的比例混合,并加入适量EB染色液,轻轻混匀,如果采用荧光显微镜下观察,一般取95μL细胞悬液和5μL AO Stain混合即可。
- 室温避光染色15min,滴加于载玻片上并加盖玻片。
- 荧光显微镜滤光片515nm观察,计数并拍照。
- 收集细胞,用1×AO Stain Buffer清洗细胞1次,加入适量的1×AO Stain Buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至106/mL。
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